原理

本方法基于“搭桥”PCR原理进行全基因合成。oligos靠3'末端互补序列相互退火，形成带有gaps的双链产物，再由DNA聚合酶补齐gaps，形成带有切刻的DNA双链，依此为模板进行PCR扩增即可得到目标基因，也可以直接使用带有切刻的DNA双链作为模板进行PCR扩增。本工具按照图示原理自动生成oligos，oligos具有统一的长度，按照节约碱基的原则设计，此外，oligos之间的重叠区的Tm相同，这有利于“搭桥”的均衡性，能够显著提高一步法PCR合成的成功率。一般不推荐单次PCR反应合成800bp以上的片段，如果目标基因较长，可以分段合成，然后通过Gibson重组或者长片段PCR“搭桥”的方式获得全长基因。另外，全基因合成对oligos的品质有一定要求，在合成oligos时请选择PAGE及更高纯度的纯化方式。